Gabarito: A

Tema central: A PCR convencional é uma técnica de amplificação de DNA que usa ciclos de desnaturação–anelamento–extensão para gerar milhões de cópias de um alvo específico. É amplamente utilizada na identificação de agentes infecciosos, inclusive vírus murinos, quando o alvo é DNA (ou cDNA, se o vírus for de RNA, via RT-PCR).

Por que a alternativa A está correta? A PCR convencional requer: DNA polimerase termoestável (ex.: Taq), molde de DNA, dNTPs (quatro desoxinucleotídeos trifosfato), primers (sequências iniciadoras), tampão com íons Mg²⁺ e água. Esses são os componentes essenciais para a reação de amplificação por PCR clássica (ASM Manual of Clinical Microbiology; UpToDate, “Polymerase chain reaction: principles and clinical applications”).

Análise das alternativas incorretas

B) Inclui transcriptase reversa e molde de RNA: isso descreve a RT-PCR (PCR com transcrição reversa), usada para vírus de RNA após converter RNA em cDNA. Não é a definição de PCR convencional (Sambrook & Russell, Molecular Cloning).

C) Cita dideoxinucleotídeos (ddNTPs), que são usados para sequenciamento de Sanger, não para PCR, pois causam término de cadeia. Além disso, “gel de agarose” é meio de análise pós-PCR, não reagente da reação.

D) Menciona sondas de hidrólise (probes), típicas da qPCR (PCR em tempo real) com sistemas TaqMan, que permitem detecção fluorescente. Na PCR convencional, bastam primers; sondas não são requeridas.

E) Traz RNA polimerase RNA-dependente, enzima viral que replica RNA a partir de RNA, não utilizada em PCR. Para RNA como molde em laboratório usa-se transcriptase reversa (RNA→cDNA) e, depois, DNA polimerase. Logo, incompatível com PCR.

Estratégias para a prova

- Identifique o termo-chave: “PCR convencional” = DNA polimerase + dNTPs + primers + tampão + DNA molde.

- Lembre o mnemônico: ddNTP = “d” de desligar (termina a extensão) → é de Sanger, não de PCR.

- Probes remetem a qPCR; transcriptase reversa remete a RT-PCR.

Aplicação prática: Para vírus murinos de DNA, PCR direta. Para vírus de RNA, primeiro RT (cDNA) e depois PCR. Referências: ASM Manual of Clinical Microbiology; UpToDate; “PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications”.

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