Durante a investigação de um surto hospitalar causado por Enterobacteriaceae multirresistentes, o
laboratório de microbiologia decidiu empregar uma técnica de tipagem molecular baseada na extração
do DNA cromossômico bacteriano, seguida de digestão com endonucleases de restrição. Os
fragmentos gerados, de grande tamanho (10 a 800 kb), foram separados por um tipo especial de
eletroforese que permite a análise de padrões de restrição altamente reprodutíveis e comparáveis
entre diferentes isolados. Essa técnica, considerada o padrão-ouro para tipagem clonal de cepas
bacterianas, é denominada

Question

Durante a investigação de um surto hospitalar causado por Enterobacteriaceae multirresistentes, o
laboratório de microbiologia decidiu empregar uma técnica de tipagem molecular baseada na extração
do DNA cromossômico bacteriano, seguida de digestão com endonucleases de restrição. Os
fragmentos gerados, de grande tamanho (10 a 800 kb), foram separados por um tipo especial de
eletroforese que permite a análise de padrões de restrição altamente reprodutíveis e comparáveis
entre diferentes isolados. Essa técnica, considerada o padrão-ouro para tipagem clonal de cepas
bacterianas, é denominada   Alternativa A: PCR convencional.   Ou Alternativa B: RT-PCR (PCR em tempo real). Ou Alternativa C: Southern blot.   Ou Alternativa D: Eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE).   Ou Alternativa E: Sequenciamento de nova geração (NGS).

Qconcursos · Accepted Answer

Alternativa [D] Eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE).   Gabarito: DFundamento decisivo: A assinatura técnica descrita no enunciado é de PFGE: DNA cromossômico bacteriano digerido por endonucleases de restrição, gerando fragmentos grandes (10 a 800 kb) separados por eletroforese em campo pulsado; esse padrão de macrorestrição é o que define a alternativa correta.Tema central: Tipagem clonal bacterianaAnálise das alternativasAErradaPCR convencional amplifica regiões específicas do DNA por ciclos térmicos. Isso não corresponde a digestão do genoma inteiro em macrofragmentos de 10 a 800 kb nem à produção de perfil de macrorestrição por eletroforese em campo pulsado. O mecanismo laboratorial é incompatível com a técnica descrita.BErradaRT-PCR em tempo real é método de detecção e quantificação de ácidos nucleicos durante a amplificação. Não gera padrão de bandas de grandes fragmentos cromossômicos obtidos por restrição e não é técnica de tipagem clonal por macrorestrição. A finalidade e o princípio técnico são diferentes do enunciado.CErradaSouthern blot é técnica de hibridização para detectar sequências específicas após eletroforese e transferência do DNA para membrana. O enunciado, porém, descreve a técnica de separação e comparação de macrofragmentos por campo pulsado, não uma detecção por sonda. A etapa definidora do Southern blot não aparece.DCertaA PFGE é a técnica classicamente usada na investigação de surtos bacterianos para comparar relatedness clonal entre isolados. Seu princípio é justamente o descrito: digestão do DNA cromossômico com enzimas de restrição, geração de grandes fragmentos e separação desses fragmentos por alternância do campo elétrico, o que permite perfis de bandas reprodutíveis. Esse conjunto técnico corresponde de forma exata à alternativa D.EErradaNGS é sequenciamento em larga escala do material genético, com lógica analítica distinta. A questão descreve especificamente digestão por enzimas de restrição seguida de separação de grandes fragmentos por campo pulsado, que gera perfil de macrorestrição em gel, e não sequenciamento.Pegadinha da questãoA banca mistura técnicas moleculares conhecidas com a descrição clássica da PFGE. As confusões reais são: associar qualquer método baseado em DNA à tipagem clonal de surtos, confundir o uso de enzimas de restrição com Southern blot e ignorar que a faixa de fragmentos grandes com eletroforese especial é característica de PFGE.Dica para questões semelhantesSe o enunciado falar em fragmentos grandes do DNA cromossômico após digestão por restrição, pense em macrorestrição genômica, não em PCR.Quando aparecer eletroforese especial para separar fragmentos de 10 a 800 kb, o ponto decisivo é PFGE.Southern blot só entra quando há transferência para membrana e hibridização com sonda; sem isso, não é o método pedido.Em investigação de surto com comparação clonal por padrão de bandas reprodutível, a descrição clássica aponta para PFGE.

Durante a investigação de um surto hospitalar causado por En...

Gabarito comentado

Gabarito: D

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