Alternativa correta: A - SDS-PAGE e reação de Bradford.

Tema central da questão: A questão aborda métodos laboratoriais essenciais para analisar pureza e quantidade de proteínas recombinantes após produção e purificação, conhecimentos fundamentais em Biologia Molecular e Biotecnologia — temas recorrentes nas provas de concursos da área de Farmácia.

Resumo teórico:

• SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis): Técnica clássica para verificar a pureza de proteínas. Permite separar proteínas com base no seu tamanho, evidenciando contaminantes ou fragmentos indesejados em uma amostra.
• Reação de Bradford: Método colorimétrico para determinar a quantidade total de proteína em uma amostra, utilizando a mudança de cor do corante Coomassie Blue ao se ligar a proteínas.

Essas técnicas são amplamente descritas em manuais de referência, como Molecular Cloning (Sambrook & Russell) e Lehninger Principles of Biochemistry.

Justificativa da alternativa correta (A):

• SDS-PAGE é o método padrão para verificar pureza, pois diferencia proteínas pelo peso molecular, revelando se há presença de outras proteínas (impurezas).
• Reação de Bradford é simples, rápida e sensível para quantificar proteínas totais.

Essas metodologias são rotineiras em laboratórios de biotecnologia e são recomendadas por diretrizes internacionais.

Análise das alternativas incorretas:

• B - Reação de Bradford quantifica proteínas, mas ELISA é usado para detecção específica, não para pureza geral.
• C - Cromatografia líquida pode purificar, mas não é método direto de verificação de pureza visual como SDS-PAGE. Western blot identifica proteínas específicas, não quantifica total.
• D - PCR quantitativo é para ácidos nucleicos, não proteínas. Citometria de fluxo não mede pureza ou quantidade total de proteínas.
• E - ELISA identifica proteínas específicas. Espectrometria de massas pode quantificar, mas é técnica avançada e não prática para rotina de pureza total.

Dicas de interpretação:

• Foque nos termos “pureza” e “quantidade” na questão, associando-os às técnicas laboratoriais corretas.
• Cuidado com pegadinhas: técnicas avançadas ou muito específicas geralmente não são as opções de rotina para análises iniciais.

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