Alternativa correta: B - brancas, devido à interrupção do quadro de leitura da subunidade lacZ-α.

1. Tema central da questão

Esta questão aborda um método clássico da biotecnologia molecular: a identificação de clones recombinantes usando alfa-complementação da β-galactosidase em Escherichia coli. Este é um dos sistemas mais usados em laboratórios para selecionar bactérias que receberam um plasmídeo com um gene de interesse.

2. Resumo teórico

O gene lacZ codifica a enzima β-galactosidase, que quebra o substrato X-gal formando um produto azul. Plasmídeos usados em clonagem possuem a sequência lacZ-α com um sítio múltiplo de clonagem (SMC), onde o DNA de interesse é inserido. Bactérias hospedeiras fornecem a subunidade lacZ-ω. Se não houver inserção, as subunidades se complementam (alfa-complementação) e a colônia é azul. Se o gene de interesse é inserido, interrompe a lacZ-α, não há complementação e a colônia é branca. (Fonte: Sambrook & Russell, "Molecular Cloning")

3. Justificativa da alternativa correta

Colônias brancas indicam que o gene de interesse foi inserido no vetor, interrompendo o quadro de leitura lacZ-α. Assim, não ocorre produção funcional da β-galactosidase e o X-gal não é hidrolisado, logo, não há coloração azul. Este é o principal indicativo de clones recombinantes.

4. Análise das alternativas incorretas

A: Incorreta. Colônias azuis mostram que o plasmídeo não recebeu o gene de interesse, pois a β-galactosidase permanece ativa.

C: Incorreta. A inserção do gene de interesse gera colônias brancas, não azuis.

D: Incorreta. A cor branca não tem relação com a repressão do gene de resistência, mas sim com a interrupção do lacZ-α.

E: Incorreta. X-gal é um indicador cromogênico, não um indutor do sistema lac.

5. Estratégias de resolução

Ao interpretar questões desse tipo:

• Identifique o marcador de seleção (coloração das colônias, resistência antibiótica).
• Busque palavras-chave como interrupção, atividade enzimática e cor das colônias.
• Desconfie de alternativas que confundem os mecanismos ou misturam conceitos (como resistência e cor de colônia).

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