A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é realizada por meio...

Tema central: O tema da questão é a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), uma técnica amplamente utilizada em laboratórios de análises clínicas e de pesquisa genética. A PCR é essencial para a amplificação de sequências específicas de DNA, o que é fundamental em testes genéticos, diagnósticos de doenças infecciosas, e pesquisa em biologia molecular.

Resumo teórico: A PCR envolve a repetição de ciclos de variação de temperatura que consistem em três etapas principais:

• Desnaturação: Ocorre em temperaturas elevadas (geralmente em torno de 95 ºC), onde a dupla hélice do DNA se separa em duas cadeias simples.
• Anelamento: Nesta etapa, que ocorre em temperaturas mais baixas (geralmente entre 50 a 58 ºC), os primers, que são curtas sequências de nucleotídeos, se ligam às extremidades complementares das sequências alvo de DNA.
• Extensão ou Polimerização: Ocorre em uma temperatura intermediária, tipicamente em torno de 72 ºC, onde a enzima DNA polimerase sintetiza uma nova cadeia de DNA, adicionando nucleotídeos ao primer.

Referência: Molecular Biology Protocols.

Justificativa da alternativa correta - Alternativa A: A opção A é correta porque descreve precisamente as etapas do ciclo de PCR. Durante a faixa de temperatura de 50 a 58 ºC, ocorre o anelamento dos primers. Em seguida, a cerca de 72 ºC, ocorre a polimerização do DNA pela ação da DNA polimerase.

Análise das alternativas incorretas:

• Alternativa B: Esta opção está incorreta porque inverte as etapas. A polimerização não ocorre antes do anelamento dos primers.
• Alternativa C: Esta alternativa está errada porque menciona a desnaturação na temperatura de 50 a 58 ºC, o que não é correto. A desnaturação ocorre a temperaturas mais altas, geralmente em torno de 95 ºC.
• Alternativa D: Esta opção também está incorreta, pois combina a desnaturação, que ocorre em alta temperatura, com a polimerização, que ocorre em 72 ºC, sem mencionar o anelamento dos primers.

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A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é uma técnica molecular amplamente utilizada para amplificar segmentos específicos de DNA. A PCR é realizada em uma série de etapas, geralmente envolvendo ciclos repetidos de aquecimento e resfriamento. Aqui estão as principais etapas da PCR:

1. Desnaturação (Denaturation):

• Temperatura: Cerca de 94-98°C.
• Duração: 20 segundos a 1 minuto ou até 5 minutos.
• O DNA alvo é aquecido para que as duas cadeias de DNA se separem, resultando na desnaturação das duplas hélices.

1. Anelamento (Annealing):

• Temperatura: Geralmente entre 50-65°C.
• Duração: 20 segundos a 1 minuto.
• Os primers (oligonucleotídeos curtos complementares às regiões flanqueadoras do DNA alvo) se ligam às sequências alvo específicas.

1. Extensão (Extension):

• Temperatura: Cerca de 72°C.
• Duração: Geralmente 1 minuto por cada 1.000 pares de bases.
• A DNA polimerase sintetiza uma nova cadeia de DNA complementar à sequência alvo usando os nucleotídeos disponíveis.