O teste imunoenzimático mais comumente usado em laboratórios...

O tema central dessa questão é o uso do ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), uma técnica imunológica amplamente utilizada em laboratórios de análises clínicas para detectar e quantificar antígenos e anticorpos. Essa técnica é fundamental para diagnósticos laboratoriais, por isso é relevante para concursos na área de biomedicina – análises clínicas.

Existem diferentes tipos de ELISA, cada um com uma aplicação específica:

• ELISA Direto: Detecta diretamente o antígeno ou anticorpo alvo com um conjugado enzimático.
• ELISA Indireto: Utiliza um anticorpo secundário conjugado à enzima para detectar o anticorpo primário.
• ELISA Sanduíche: O antígeno fica "sanduichado" entre dois anticorpos, sendo altamente específico para o antígeno.
• ELISA Competitivo: Competição entre o antígeno presente na amostra e um antígeno padrão marcado, sendo inversamente proporcional a cor gerada.

A alternativa correta é a D - no ELISA competitivo, a ausência de cor ao final da reação indica que a amostra é reagente. No ELISA competitivo, quanto mais antígeno houver na amostra, menos cor se desenvolverá, pois o antígeno não marcado da amostra competirá com o antígeno marcado para se ligar aos anticorpos. Assim, a ausência ou diminuição da cor indica uma alta concentração do antígeno na amostra.

Vamos analisar as alternativas incorretas:

A - no ELISA de captura de IgM, a presença desse anticorpo na amostra resultará numa reação fluorescente. Essa afirmação está incorreta porque o ELISA não utiliza fluorescência; ele geralmente utiliza uma reação colorimétrica onde a presença de uma cor indica a presença do anticorpo ou antígeno.

B - no ELISA sanduíche, o antígeno da amostra está conjugado a uma enzima. No ELISA sanduíche, o antígeno não está conjugado a uma enzima; em vez disso, ele é capturado entre dois anticorpos, e um dos anticorpos é que estará ligado a uma enzima.

C - no ELISA indireto, as placas plásticas são sensibilizadas com o anticorpo. Essa alternativa é incorreta, pois no ELISA indireto, as placas são sensibilizadas com o antígeno e não com o anticorpo. O anticorpo primário liga-se ao antígeno, e o sinal é amplificado por um anticorpo secundário conjugado à enzima.

Para interpretar questões como essa, é importante que você conheça bem as características de cada tipo de ELISA e saiba como eles se diferenciam em termos de aplicação e resultado visual.

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A) Errado. ELISA de captura as placas plásticas são sensibilizadas com o anticorpo.

B) Errado. ELISA sanduíche = de captura.

C) Errado. ELISA indireto as placas plásticas são sensibilizadas com o antígeno.

D) Gabarito.

No Elisa de captura IgM, resulta em em um produto corado de intensidade proporcional à concentração de IgM específica presente na amostra.

D) no ELISA competitivo, quando a amostra é reagente a ligação do conjugado não acontece, não há ação da enzima sobre o substrato e, consequentemente, não há desenvolvimento de cor pelo cromógeno.

Atenção: se não houver anticorpo específico na amostra, ou seja, se ela for uma amostra não reagente, a ação do conjugado sobre o substrato acontecerá e será evidenciada pelo desenvolvimento de cor promovido pela oxidação do cromógeno. Por isso, nesta etapa é adicionada uma solução de bloqueio que interrompe esse processo de oxidação para evitar o aparecimento de cor em todas as amostras levando a resultados falso-negativos.