A questão aborda a técnica de Western Blot, uma ferramenta fundamental em biologia molecular para a detecção e análise de proteínas. Vamos analisar cada uma das afirmativas apresentadas na questão para compreender o raciocínio por trás da resposta correta.

I. Na análise de proteínas por eletroforese em condições desnaturantes, os polipeptídios ligam-se ao reagente SDS (dodecil sulfato de sódio) e tornam-se carregados negativamente.

Esta afirmativa está correta. O SDS é um detergente aniónico que se liga às proteínas, conferindo-lhes uma carga negativa proporcional ao seu tamanho. Isso permite que, durante a eletroforese, as proteínas migrem em direção ao ânodo (eletrodo positivo), separando-se com base no seu tamanho molecular. Esse é um conceito fundamental no Western Blot, pois a separação eficiente das proteínas é essencial para a análise posterior.

II. Na transferência de polipeptídios do gel de poliacrilamida para membranas de nitrocelulose é importante que a membrana esteja próxima ao eletrodo negativo, uma vez que a transferência se dá do polo positivo para o negativo.

Esta afirmativa está incorreta. Durante o processo de transferência no Western Blot, as proteínas migram do gel para a membrana sob a influência de um campo elétrico, indo do cátodo (negativo) para o ânodo (positivo). Assim, a membrana deve ser posicionada próxima ao ânodo, não ao cátodo, para capturar as proteínas que se movem nessa direção.

III. O substrato cromógeno NBT/BCIP é um dos mais utilizados para revelar os anticorpos conjugados à peroxidase.

Esta afirmativa também está incorreta. O NBT/BCIP é um substrato utilizado para enzimas fosfatase alcalina, não para peroxidase. Para revelar anticorpos conjugados à peroxidase, utiliza-se frequentemente o DAB (diaminobenzidina) ou outros substratos adequados para a peroxidase. Portanto, a afirmativa contém uma incorreção no tipo de enzima para o qual o substrato é utilizado.

Com base na análise, a alternativa correta é a A - I, somente. A primeira afirmativa está correta, enquanto as outras contêm erros conceituais sobre o processo de Western Blot.

Espero que essa explicação tenha esclarecido suas dúvidas sobre o tema. Gostou do comentário? Deixe sua avaliação aqui embaixo!

A

Afirmativa I: CORRETA

Afirmativa II: INCORRETA. Na transferência de polipeptídios do gel de poliacrilamida para membranas de nitrocelulose é importante que a membrana esteja próximo ao eletrodo negativo, uma vez que a transferência se dá do polo positivo para o negativo. É o contrário do polo NEGATIVO para POSITIVO.

Afirmativa III: INCORRETA. O Substrato cromógeno NBT/BCIT é um dos mais utilizados para revelar os anticorpos conjugados à peroxidase.

O substrato cromógeno NBT/BCIT é a combinação de conjugados de anticorpo secundário (anti-camundongo e anti-coelho purificados por afinidade) com FOSFATASE ALCALINA , que forma um precipitado ROXO Insolúvel.