Tema Central: A questão aborda a expressão e purificação de proteínas recombinantes utilizando o vetor de expressão pGEX-2T em Escherichia coli. É importante compreender como funcionam os vetores de expressão, os promotores fortes e a técnica de purificação por cromatografia de afinidade.

Justificativa para a Alternativa Correta (A): O vetor pGEX-2T possui, de fato, o promotor tac, que é um promotor híbrido derivado dos promotores trp e lac. Ele é conhecido por ser um promotor forte e é induzido pela presença de IPTG (isopropil-β-D-tiogalactopiranosídeo), que promove uma alta expressão da proteína de fusão KLM04/GST. Este processo é amplamente utilizado em biotecnologia para a produção em larga escala de proteínas recombinantes.

Análise das Alternativas Incorretas:

B - A coluna de afinidade contém resina conjugada à trombina: Esta afirmação está incorreta porque a coluna de afinidade para proteínas de fusão com GST geralmente utiliza resinas conjugadas com glutationa, e não com trombina. A glutationa interage especificamente com a GST, permitindo a purificação da proteína de fusão.

C - A proteína de KLM04 não pode ser isolada da GST por meio da clivagem por trombina: A declaração é incorreta. O vetor pGEX-2T é projetado para facilitar a clivagem da proteína de fusão com trombina, permitindo a separação da proteína de interesse (KLM04) da GST.

D - A fusão com KLM04 favorece a interação da GST com glutationa: Esta afirmação está incorreta. A interação de GST com glutationa é uma característica intrínseca da GST e não é influenciada pela proteína KLM04; a fusão com KLM04 não melhora essa interação.

E - O vetor pGEX-2T tem o promotor bac: Esta alternativa está errada porque o vetor pGEX-2T não utiliza o promotor bac, mas sim o promotor tac, como explicado anteriormente.

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