No laboratório de ensino e pesquisa em análises
clínicas de uma faculdade, amostras de 100
pacientes foram obtidas para determinação sérica
de glicose, em uma pesquisa clínica. Foi
necessário preparar com antecedência os
materiais, os equipamentos e os reagentes
requeridos durante o experimento. Para a
execução da técnica, os seguintes itens devem
estar disponíveis: kit de reagentes para dosagem
de glicose; uma pipeta automática para o volume
de 10 µL e outra para o volume de 1.000 µL;
ponteiras para pipetas automáticas de 10 µL e de
1.000 µL; tubos de ensaio; estante para tubos de
ensaio; banho-maria; fotômetro para leitura de
absorbância em 505 nm; cronômetro e recipiente
para descarte de tubos e ponteiras após uso. A
bula do teste descreve o seguinte procedimento:
misturar 1 mL de reagente com 10 µL da amostra,
incubar em banho-maria a 37 °C por 10 minutos e,
em seguida, determinar a absorbância em 505 nm;
a cor da reação é estável por 30 minutos.
Considerando que falhas podem ocorrer durante o
preparo e execução da técnica, assinale a
alternativa correta.

Question

No laboratório de ensino e pesquisa em análises
clínicas de uma faculdade, amostras de 100
pacientes foram obtidas para determinação sérica
de glicose, em uma pesquisa clínica. Foi
necessário preparar com antecedência os
materiais, os equipamentos e os reagentes
requeridos durante o experimento. Para a
execução da técnica, os seguintes itens devem
estar disponíveis: kit de reagentes para dosagem
de glicose; uma pipeta automática para o volume
de 10 µL e outra para o volume de 1.000 µL;
ponteiras para pipetas automáticas de 10 µL e de
1.000 µL; tubos de ensaio; estante para tubos de
ensaio; banho-maria; fotômetro para leitura de
absorbância em 505 nm; cronômetro e recipiente
para descarte de tubos e ponteiras após uso. A
bula do teste descreve o seguinte procedimento:
misturar 1 mL de reagente com 10 µL da amostra,
incubar em banho-maria a 37 °C por 10 minutos e,
em seguida, determinar a absorbância em 505 nm;
a cor da reação é estável por 30 minutos.
Considerando que falhas podem ocorrer durante o
preparo e execução da técnica, assinale a
alternativa correta. Alternativa A: Se for usado 2,0 mL de reagente, ao invés de
1,0 mL, serão pipetados 20 µL da amostra para
corrigir o erro. Ou Alternativa B: Se cada pipetagem demorar 15 segundos e se
todas as 100 amostras forem pipetadas de uma só
vez, haverá tempo suficiente para ler todas as
absorbâncias antes que a cor das reações perca
estabilidade. Ou Alternativa C: Se a pipeta automática for ajustada para um
volume de 50 µL, ao invés de 10 µL, os valores
encontrados serão os mesmos do que no
procedimento correto. Ou Alternativa D: Se o banho-maria estiver em temperatura de
20 °C, as reações irão ocorrer da mesma maneira
que em 37 °C. Ou Alternativa E: Se a leitura das absorbâncias for realizada em
545 nm, os resultados finais serão aceitáveis.

Qconcursos · Accepted Answer

Alternativa [A] Se for usado 2,0 mL de reagente, ao invés de
1,0 mL, serão pipetados 20 µL da amostra para
corrigir o erro. Gabarito: AFundamento decisivo: O critério decisivo é a proporcionalidade volumétrica da mistura reacional: a bula fixa 1 mL de reagente para 10 µL de amostra, e ao dobrar o reagente para 2 mL é necessário dobrar a amostra para 20 µL para manter a mesma razão amostra:reagente e a diluição final do analito. Isso sustenta o gabarito A e exclui as demais alternativas por alterarem volume, tempo, temperatura ou comprimento de onda do método.Tema central: Proporcionalidade da reaçãoAnálise das alternativasACertaA alternativa A está correta porque preserva a composição final da reação. No método descrito, o sinal analítico depende da diluição final da amostra na mistura com o reagente. Se o volume de reagente passa de 1,0 mL para 2,0 mL, a amostra também precisa ser duplicada de 10 µL para 20 µL para manter a mesma proporção de 1:100 entre amostra e reagente. Isso sustenta tecnicamente a comparabilidade do resultado dentro do princípio de ensaios colorimétricos. A própria base ressalta que, embora em rotina validada o ideal seja repetir exatamente o protocolo da bula, entre as opções essa é a única tecnicamente defensável.BErradaEstá errada por incompatibilidade matemática com a estabilidade da cor. Pipetar 100 amostras a 15 segundos cada consome 1.500 segundos, ou 25 minutos, apenas na pipetagem. Ainda faltariam 10 minutos de incubação a 37 °C e tempo adicional para as leituras em 505 nm. Portanto, não há tempo suficiente para processar todas de uma só vez e ler tudo com segurança dentro da janela de estabilidade de 30 minutos.CErradaEstá errada porque altera isoladamente a razão amostra:reagente. Usar 50 µL de amostra no lugar de 10 µL, mantendo 1 mL de reagente, aumenta cinco vezes a quantidade de analito na mistura reacional e modifica a concentração final na reação. Isso tende a alterar a absorbância, de modo que os valores não serão os mesmos do procedimento correto.DErradaEstá errada porque a temperatura faz parte da padronização analítica do método. A incubação a 37 °C foi especificada para garantir a cinética esperada da reação enzimática/colorimétrica. A 20 °C, a velocidade de reação é diferente, com impacto na formação do produto cromogênico. Portanto, a reação não ocorrerá da mesma maneira que em 37 °C.EErradaEstá errada porque o comprimento de onda de leitura não é intercambiável por aproximação. O método especifica leitura em 505 nm, que é o comprimento de onda analítico validado para o cromógeno. Ler em 545 nm pode alterar a absorbância medida e comprometer a exatidão do resultado, de modo que não se pode considerar os resultados automaticamente aceitáveis.Pegadinha da questãoA banca explora duas confusões reais: tratar a alternativa A como errada apenas por não reproduzir literalmente a bula, ignorando o princípio de proporcionalidade da reação, e esquecer na alternativa B que o tempo total inclui pipetagem, incubação e leitura, não só a estabilidade da cor isoladamente.Dica para questões semelhantesEm método colorimétrico, confira primeiro se a razão amostra:reagente foi mantida; alterar só um volume muda a diluição final e tende a mudar o resultado.Quando houver estabilidade da cor, some todo o tempo operacional real: preparo, pipetagem, incubação e leitura.Temperatura e comprimento de onda especificados no método são condições analíticas do ensaio; não podem ser tratados como equivalentes sem validação.

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No laboratório de ensino e pesquisa em análises clínicas de...

Gabarito comentado

Gabarito: A

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