A eletroforese é uma técnica usada em bioquímica, genética e biologia molecular para separar moléculas de acordo com seu tamanho ou carga. Com relação à técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida com duodecil sulfato de sódio (SDSPAGE), assinale a afirmativa incorreta.

Question

A

É utilizada para separação de proteínas de acordo com seu tamanho. Proteínas pequenas vão passar mais facilmente pela malha do gel, enquanto proteínas maiores vão ter mais dificuldade.

B

O duodecil sulfato de sódio (SDS) é um detergente aniônico que desnatura estruturas secundárias e estruturas terciárias não mantidas por pontes dissulfeto e aplica uma carga negativa em cada proteína de acordo com sua massa.

C

As proteínas desnaturadas são aplicadas nos poços do gel de empilhamento ou stacking e submergidas em um tampão específico. Uma corrente elétrica é aplicada através do gel, levando à migração das proteínas carregadas negativamente em direção ao catodo.

D

Independentemente do sistema, a preparação da técnica requer a polimerização entre duas placas de vidro, de duas camadas diferentes de poliacrilamida.

E

Além de SDS, as proteínas podem ser previamente aquecidas a quase sua ebulição na presença de um agente redutor, como o Persulfato de amônio ou o betamercaptoetanol (BME).

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Alternativa [E] Além de SDS, as proteínas podem ser previamente aquecidas a quase sua ebulição na presença de um agente redutor, como o Persulfato de amônio ou o betamercaptoetanol (BME). Gabarito: EFundamento decisivo: O critério decisivo é a função dos reagentes no SDS-PAGE: o persulfato de amônio não é agente redutor da amostra, mas iniciador da polimerização da acrilamida; por isso, a alternativa E contraria a base técnico-conceitual e permanece como a incorreta do gabarito oficial.Tema central: Reagentes e princípio do SDS-PAGEAnálise das alternativasAErradaCorreta. O SDS-PAGE separa proteínas principalmente por tamanho; proteínas menores passam com mais facilidade pela malha do gel.BErradaCorreta. O SDS é um detergente aniônico que desnatura proteínas e lhes confere carga negativa, sem ser o redutor das pontes dissulfeto.CErradaContém impropriedade técnica, pois proteínas carregadas negativamente migram em direção ao ânodo, e não ao catodo; ainda assim, o gabarito oficial da questão é E.DErradaCorreta no contexto da técnica convencional, ao mencionar a preparação com duas camadas de poliacrilamida e a polimerização entre placas de vidro.ECertaA alternativa E é a incorreta porque atribui ao persulfato de amônio a mesma função redutora do beta-mercaptoetanol. No preparo da amostra para SDS-PAGE, o beta-mercaptoetanol pode reduzir pontes dissulfeto, enquanto o persulfato de amônio atua na polimerização da acrilamida, não como redutor.Pegadinha da questãoA confusão real explorada foi misturar reagentes do preparo da amostra com reagentes da preparação do gel, tratando o persulfato de amônio como se tivesse a mesma função redutora do beta-mercaptoetanol.Dica para questões semelhantesSepare mentalmente três funções no SDS-PAGE: SDS desnatura e padroniza a carga negativa, agente redutor rompe pontes dissulfeto, e persulfato de amônio participa da polimerização do gel.Quando a alternativa citar reagentes, verifique se a função atribuída é de preparo da amostra ou de montagem do gel.Em SDS-PAGE, a separação é predominantemente por tamanho porque a razão carga/massa fica aproximadamente uniformizada pelo SDS.

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Gabarito comentado

Gabarito: E

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