Tema central: Cromatografia de exclusão molecular (também chamada de gel filtração) é uma técnica de separação que discrimina biomoléculas pelo tamanho hidrodinâmico. A fase estacionária contém esferas porosas; moléculas grandes não entram nos poros (são “excluídas”) e eluem primeiro, enquanto moléculas pequenas penetram nos poros e eluem depois. Essa propriedade se correlaciona com a massa molecular nativa e conformação (raio de Stokes).

Alternativa correta – A: tamanho
Justifica-se porque o princípio físico é a exclusão por porosidade. Em prática laboratorial e clínica, é usada para desalting, troca de tampão, separação de agregados (ex.: anticorpos monoclonais) e estimativa de massa molecular sem desnaturar a proteína. Referências: Lehninger – Principles of Biochemistry; Stryer – Biochemistry; Scopes – Protein Purification; Tietz – Clinical Chemistry.

Por que as demais estão incorretas?

B – carga: Descreve cromatografia de troca iônica (cation/anion exchange), que separa por interações eletrostáticas moduladas por pH e gradiente de sal. Não há peneiramento por poros. (Scopes; Tietz)

C – afinidade: É a cromatografia de afinidade, baseada no reconhecimento específico ligante–receptor (ex.: proteína A/G–IgG; Ni-NTA–His-tag). A força motriz é a especificidade, não o tamanho. (Lehninger; Stryer)

D – hidrofobicidade: Refere-se à cromatografia de interação hidrofóbica ou fase reversa, que separa por caráter hidrofóbico sob altas concentrações salinas ou solventes orgânicos. Critério: hidrofobicidade, não tamanho. (Scopes)

E – solubilidade: “Solubilidade” remete a precipitação/salting-out (ex.: sulfato de amônio), que não é cromatográfica. Não utiliza matriz porosa para eluição diferencial. (Tietz)

Estratégia de prova: Associe exclusão a “poros” e lembre: os maiores eluem primeiro. Confusões comuns: carga = troca iônica; afinidade = chave-fechadura; hidrofobicidade = interação com fase apolar; solubilidade = precipitação, não cromatografia.

Gabarito: A – tamanho.

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