Tema central: técnicas de separação de proteínas baseadas na solubilidade em diferentes forças iônicas. Esse princípio é conhecido como salting-out, muito usado em laboratórios biomédicos e veterinários para fracionar proteínas de soro, enzimas e hormônios a partir de tecidos.

Alternativa correta: D — precipitação por sulfato de amônia

A precipitação por sulfato de amônio explora o efeito do aumento da força iônica na solubilidade proteica. Em altas concentrações de sal, íons competem pela água, reduzindo a camada de hidratação das proteínas e favorecendo interações hidrofóbicas entre elas, levando à precipitação seletiva. Proteínas diferentes precipitam em faixas de saturação distintas (ex.: 30%, 50%, 80% de (NH₄)₂SO₄), permitindo fracionamento. É um método suave (mantém atividade enzimática) e altamente reprodutível, por isso é clássico como primeira etapa de purificação (Lehninger; Scopes).

Análise das alternativas incorretas

A) Diálise: separa por tamanho (difusão através de membrana semipermeável) e troca tampão; não separa proteínas por solubilidade em diferentes forças iônicas. É frequentemente usada após o salting-out para remover excesso de sal.

B) Cromatografia de troca iônica: separa por carga líquida das proteínas em dado pH, pela interação com matrizes carregadas (DEAE, CM). Apesar de usar gradiente de sal para eluir, o mecanismo de separação é a afinidade eletrostática, não a solubilidade diferencial em força iônica. Pegadinha clássica: usar sal no eluição ≠ separar por solubilidade.

C) Eletroforese em gel: separa por carga e/ou tamanho sob campo elétrico (ex.: SDS-PAGE). Não depende da força iônica para induzir precipitação, e sim da mobilidade eletroforética.

E) Ultrafiltração: processo de concentração e fracionamento por tamanho usando membranas com corte molecular (kDa). Útil para concentrar/desalinar, mas não seleciona por solubilidade em diferentes forças iônicas.

Estratégia de prova: ao ver os termos “solubilidade” e “força iônica”, associe imediatamente a precipitação por salting-out (sulfato de amônio). Se o enunciado falar em “carga” e “pH”, pense em troca iônica ou focalização isoelétrica. Se mencionar “campo elétrico”, é eletroforese. “Membrana/corte (kDa)” sugere ultrafiltração/diálise.

Referências essenciais: Lehninger Principles of Biochemistry; Scopes RK. Protein Purification: Principles and Practice; Current Protocols in Protein Science. Esses textos descrevem o salting-out como etapa inicial padrão na purificação de proteínas.

Gabarito: D

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