Alternativa correta: B

Tema central: Técnicas experimentais que determinam diretamente a estrutura tridimensional de proteínas, ou seja, geram mapas de densidade/coord. atômicas suficientes para modelagem 3D.

Justificativa da alternativa B (cristalografia, criomicroscopia eletrônica e RMN): Essas três são as plataformas consagradas para estrutura 3D em nível atômico ou quase atômico:
- Cristalografia de raios X: requer cristal; oferece alta resolução para muitas proteínas/complexos.
- Criomicroscopia eletrônica (cryo-EM): não exige cristal; ideal para grandes complexos e estruturas difíceis de cristalizar; alcança resolução quase atômica (Nobel de Química 2017).
- Ressonância Magnética Nuclear (RMN): determina estruturas em solução, útil para proteínas pequenas/médias e para estudar dinâmica conformacional.
Referências: Alberts – Molecular Biology of the Cell; Lehninger – Principles of Biochemistry; wwPDB; revisão em Nature Methods/Nobel Prize 2017.

Análise das alternativas incorretas:

A – Cromatografia de exclusão por tamanho, eletroforese e espectrometria de massas são técnicas de purificação e caracterização (tamanho, massa, pureza, PTMs). Não geram coordenadas 3D. Mesmo variantes estruturais de MS (HDX-MS, crosslinking-MS) fornecem restrições, não uma estrutura completa.

C – “Cristalografia e RMN” estão corretas, porém incompletas: falta a cryo-EM, hoje pilar majoritário para grandes complexos e alvos recalcitrantes. Em provas atuais, espera-se a tríade.

D – Inclui espectrometria de massas, que não é método principal de determinação 3D. A presença de uma técnica não estruturadora invalida o conjunto quando a pergunta exige as “mais utilizadas” para estrutura.

E – “Cristalografia e cryo-EM” também é incompleta, pois exclui a RMN, essencial para estruturas em solução e estudos de dinâmica.

Estratégia para a prova: Ao ver “estrutura tridimensional”, pergunte-se: “Esta técnica gera mapa de densidade ou coordenadas atômicas?” Se não, é provavelmente suporte/analítica, não determinante de estrutura. Cuidado com distratores comuns como eletroforese, cromatografia e MS.

Resumo operacional (para memorização): Triáde 3D = Cristalografia + Cryo-EM + RMN. Técnicas de purificação/rotina não entram.

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