Tema central: produção clássica de anticorpos monoclonais por hibridomas (técnica de Köhler e Milstein). Envolve imunizar um animal, fundir linfócitos B produtores de anticorpos com células de mieloma e selecionar clones que secretam um anticorpo específico.

Alternativa correta (não corresponde a etapa): B – IPTG (isopropylthio-β-galactoside) é um indutor do operon lac, usado para induzir expressão gênica em bactérias (E. coli) em sistemas recombinantes. Não é utilizado na geração de hibridomas, que ocorre em células de mamífero e não envolve indução bacteriana. Portanto, IPTG é alheio ao fluxo de produção de anticorpos monoclonais por hibridoma.

Por que as demais estão corretas no contexto de hibridomas?

A - Imunização de animais experimentais: passo inicial. O animal (geralmente camundongo) é imunizado com o antígeno para expandir linfócitos B específicos. Após resposta adequada, o baço é colhido. Referência: Janeway’s Immunobiology; Kuby Immunology.

C - Preparo de linhagem celular de mieloma: utiliza-se uma linhagem de mieloma não secretora e deficiente em via de resgate (ex.: HGPRT-), essencial para seleção em meio HAT. Essas células conferem imortalidade ao híbrido. (Köhler & Milstein, Nature 1975).

D - Isolamento de linfócitos B: os linfócitos B do baço (ou linfonodo) do animal imunizado são separados para fornecer a especificidade do anticorpo desejado. Depois serão fundidos aos mielomas.

E - Fusão celular induzida por PEG: o polietilenoglicol (PEG) promove a fusão das membranas entre linfócitos B e mielomas, formando os hibridomas. Alternativamente, pode-se usar eletrofusão, mas PEG é o clássico.

Dica de prova (pegadinha): a palavra-chave “hibridoma” remete a técnicas de cultura de células de mamíferos (imunização, fusão por PEG, seleção em meio HAT, clonagem por diluição limitante, triagem por ELISA). Termos como IPTG, operon lac, E. coli sinalizam expressão bacteriana e não fazem parte do processo clássico de hibridoma.

Resumo prático do fluxo clássico: imunização → coleta do baço → isolamento de linfócitos B → fusão com mieloma (PEG) → seleção em HAT → clonagem → triagem dos supernatantes → expansão e produção do anticorpo monoclonal.

Referências essenciais: Janeway’s Immunobiology (últimas edições); Kuby Immunology; UpToDate – Monoclonal antibodies: production by hybridoma; Köhler G, Milstein C. Nature, 1975.

Gabarito: B

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