Tema central: tecnologia de phage display para seleção de anticorpos. Nessa técnica, fragmentos de anticorpos (geralmente scFv) são exibidos na superfície de bacteriófagos, permitindo a seleção dos que melhor se ligam a um antígeno (“biopanning”). Referências: Abbas – Cellular and Molecular Immunology; Janeway’s Immunobiology; UpToDate (Monoclonal antibodies: production and engineering).

Alternativa INCORRETA (gabarito): E – Afirma que a produção do mAb em sistemas procarióticos “sempre permite” gerar imunoglobulinas glicosiladas. Isso é falso. Bactérias (como E. coli) não possuem retículo endoplasmático/Golgi, logo não realizam N-glicosilação da região Fc (Asn297) nem glicosilação complexa em anticorpos. Em E. coli obtêm-se, em geral, fragmentos aglicosilados (scFv, Fab) e, quando muito, cadeias com dobra controlada no periplasma. Para mAbs IgG totalmente funcionais e glicosilados, usam-se sistemas eucarióticos (ex.: células CHO/HEK293) ou leveduras/planta geneticamente glicoengenheiradas. Ver: Walsh G. Nat Biotechnol; EMA/WHO guidelines sobre bioterapêuticos.

Por que as demais estão corretas?

A) Bibliotecas de anticorpos podem ser construídas a partir de mRNA de linfócitos B humanos, convertido em cDNA e amplificado por PCR para obter regiões variáveis. Isso compõe bibliotecas imunes ou “naïve/sintéticas”. Conceito alinhado aos textos de referência.

B) As HCs e LCs (cadeias pesada e leve) podem ser combinadas como scFv (VH-VL ligados por um peptídeo). Esses fragmentos são exibidos como fusão a proteínas do capsídeo do fago (tipicamente pIII/pVIII), gerando um repertório diversificado na superfície do fago. Correto.

C) Os anticorpos exibidos mantêm o domínio de ligação ao antígeno; clones com maior afinidade são enriquecidos por ciclos de biopanning. Esse é o princípio-chave do método (seleção baseada em afinidade/avidez).

D) Após seleção, procede-se ao sequenciamento dos insertos de DNA dos fagos para identificar as sequências de VH/VL; essas podem ser sintetizadas e subclonadas em sistemas de expressão apropriados (procarióticos para fragmentos; eucarióticos para mAbs completos), o que está de acordo com a prática.

Dica de prova (pegadinha): Atenção a termos absolutos como “sempre” e a palavras-chave como “glicosiladas”. Lembre: procariontes não glicosilam anticorpos; logo, mAbs terapêuticos exigem expressão em células de mamíferos para glicosilação adequada (impacta Fc, ADCC e meia-vida).

Vocabulário útil: scFv = fragmento de cadeia única; HC/LC = cadeia pesada/leve; biopanning = seleção por ligação ao antígeno em ciclos sucessivos.

Fontes para estudo: Abbas & Lichtman – Cellular and Molecular Immunology; Janeway’s Immunobiology; UpToDate (Antibody engineering; Phage display); Walsh G. Biopharmaceuticals; diretrizes OMS/EMA sobre produção de anticorpos monoclonais.

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