Tema central: adesão de células epiteliais primárias ao substrato em cultura. Essas células dependem de interações específicas com proteínas da matriz extracelular (MEC) para ancoragem e sobrevivência, especialmente nas primeiras horas de cultivo.

Alternativa correta: B – Ausência de revestimento da superfície com componentes da MEC (ex.: colágeno, fibronectina, laminina) compromete a adesão inicial. Células epiteliais primárias expressam integrinas que reconhecem esses ligantes, promovendo focal adhesions e sinalização de sobrevivência (FAK/PI3K). Sem esses ligantes, a adesão é ineficiente, gerando baixa fixação e maior suscetibilidade à apoptose por perda de ancoragem (anoikis). Essa necessidade é amplamente descrita em guias de cultura celular (Freshney – Culture of Animal Cells; ATCC Cell Culture Guide; notas técnicas Corning/ Thermo Fisher).

Por que as demais estão incorretas?

A. A temperatura de 37 °C é o padrão para células de mamíferos, incluindo epiteliais de camundongo, e não é causa típica de má adesão. Em condições usuais, alterações de adesão não decorrem de temperatura adequada (ATCC; Freshney).

C. 10% de SFB é concentração habitual para manutenção/proliferação inicial. O soro fornece fatores de crescimento e proteínas, mas não substitui a função da MEC na ancoragem específica. Aumentar soro não corrige a falta de ligantes de integrina e pode até alterar fenótipo em longo prazo (Freshney; UpToDate – Principles of cell culture).

D. 5% de CO₂ com tampão bicarbonato é o sistema padrão para manter pH fisiológico (~7,2–7,4). Não “impede” adesão; ao contrário, sustenta o microambiente adequado. Problemas de pH por CO₂ só ocorrem quando há incompatibilidade entre a formulação do tampão do meio e a atmosfera, o que não é o cenário descrito (ATCC; guias de incubação).

E. É impreciso afirmar que células epiteliais primárias “não requerem superfícies tratadas”. Muitas necessitam superfícies tratadas e/ou revestidas para aderência eficiente e manutenção do fenótipo. Atribuir o problema à “qualidade do SFB” ignora a dependência de MEC dessas células (Freshney; Corning application notes).

Estratégia de prova: destaque palavras-chave como “primárias” e “adesão no início”. Em cultura, problemas imediatos de ancoragem em células primárias apontam para substrato e MEC, não para CO₂, temperatura ou concentração de soro. Incubação a 37 °C/5% CO₂ e 10% SFB são condições padrão.

Obs. complementar: a mudança morfológica e queda proliferativa após passagens em células primárias é compatível com senescência/estresse e perda de fenótipo, fenômenos esperados em primárias e não relacionados diretamente à adesão inicial.

Referências essenciais: Freshney RI. Culture of Animal Cells; ATCC Cell Culture Guide; Corning Technical Resources; UpToDate – Overview of animal cell culture.

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