Tema central: Western Blot (immunoblot) é uma técnica imunológica para detecção e análise de proteínas. Envolve separação por SDS-PAGE, transferência para membrana (PVDF/nitrocelulose), bloqueio, incubação com anticorpo primário específico e anticorpo secundário conjugado (enzima), seguido de detecção (quimioluminescência/coloração) e quantificação relativa por densitometria usando um controle de carregamento (ex.: β-actina, GAPDH). Referências: UpToDate; Harrison’s; Sambrook & Russell (Molecular Cloning).

Alternativa correta: C — “utiliza anticorpos específicos para detectar proteínas de interesse, permitindo a quantificação relativa dessas proteínas.” Correta porque o Western Blot é um método imunológico de alta especificidade para proteínas. A quantificação é relativa, comparando intensidade de bandas com um controle interno, nunca absoluta sem curva-padrão. Aplicações: confirmação histórica em sorologia (ex.: HIV), validação de expressão proteica, detecção de isoformas e proteínas pós-traduzidas. (UpToDate; Current Protocols in Protein Science)

Análise das alternativas incorretas

A — “detectar ácidos nucleicos (DNA/RNA)”: descreve blots de ácidos nucleicos. Southern blot detecta DNA; Northern blot detecta RNA. Western Blot é para proteínas, não ácidos nucleicos.

B — “investigar mutações, rearranjos e amplificações em DNA”: isso é feito por PCR/RT-PCR, NGS, FISH ou Southern blot. Western Blot não avalia genoma, e sim o proteoma.

D — “quantificação de mRNA”: é papel de Northern blot ou RT-qPCR. Lembre: mRNA ≠ proteína (regulação pós-transcricional). Western mede proteína, não mRNA.

E — “detectar e quantificar proteínas, anticorpos ou lipídeos”: é ampla e imprecisa. Western Blot detecta proteínas. Quantificação de anticorpos é clássica do ELISA (quantitativo/semiquantitativo); imunoblot pode detectar anticorpos de forma confirmatória e qualitativa em alguns testes. Lipídeos não são alvos do Western.

Dicas de prova (pegadinhas)

- Associe termos-chave: proteína + anticorpo + membrana → Western Blot; DNA → Southern; RNA/mRNA → Northern; quantificar anticorpos/antígeno solúvel → ELISA.

- “Quantificação” no Western é relativa e requer controle de carregamento. Se falar em quantificação absoluta sem curva padrão, desconfie.

Aplicação clínica: ainda útil na validação de biomarcadores e em pesquisa translacional. Em sorologia (ex.: HIV), diretrizes atuais priorizam algoritmos com testes de 4ª geração e ensaios de diferenciação, não mais Western para confirmação (CDC/OMS), mas o princípio técnico permanece central em Imunologia Laboratorial.

Gabarito: C

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