A questão aborda o uso da tripsina, uma enzima proteolítica crucial no contexto de cultivo celular. A tripsina é utilizada para dissociar células aderentes de suas superfícies durante o processo de subcultivo, permitindo que as células sejam transferidas para novos frascos de cultura.

A alternativa correta é a B: "Preparar a solução de tripsina em tampão PBS estéril, aliquotar em pequenos volumes, e armazená-los a -20°C." Vamos entender por quê:

Justificativa para a alternativa correta: A preparação da solução de tripsina em PBS (Phosphate Buffered Saline) é recomendada, pois esse tampão mantém a estabilidade da enzima sem íons de cálcio e magnésio, que podem ativar a tripsina prematuramente. Aliquotar em pequenos volumes e armazenar a -20°C é crucial para preservar a atividade enzimática e evitar múltiplas descongelagens, que comprometem a eficácia da tripsina.

Análise das alternativas incorretas:

A: Dissolver a tripsina diretamente no meio de cultura completo e adicionar soro fetal bovino (SFB) após a dissolução é incorreto. O SFB contém inibidores de tripsina que neutralizam sua atividade, tornando essa abordagem ineficaz para dissociar células. A tripsina deve ser utilizada de forma controlada antes da adição de SFB.

C: Dissolver a tripsina em PBS com cálcio e magnésio compromete a solução, pois esses íons podem ativar a tripsina prematuramente, levando à perda de controle sobre a dissociação celular. Além disso, armazenar a solução em temperatura ambiente pode deteriorar a atividade da enzima.

D: Preparar a solução de tripsina em PBS com cálcio e magnésio e utilizar um pH alcalino é inadequado. O ambiente alcalino pode desestabilizar a enzima, e autoclavar para esterilização destruiria a atividade proteolítica da tripsina, pois o calor desnatura a proteína.

Essa questão destaca a importância de compreender o manejo adequado de soluções enzimáticas em laboratório, essencial para garantir a viabilidade celular durante o subcultivo. Manter a eficácia da tripsina requer conhecimento técnico sobre seu preparo e armazenamento.

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