Questões de Concurso Público FIOCRUZ 2010 para Tecnologista em Saúde - Micobactérias

A técnica de citometria de fluxo vem sendo aplicada na avaliação da susceptibilidade a antimicrobianos em micobactérias com resultados mais rápidos do que métodos tradicionais. Sobre o tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Determinação da concentração mínima inibitória de antimicrobianos para cepas clínicas de Mycobacterium tuberculosis em até 24h.

II. Detecção da susceptibilidade ou da resistência a antimicrobianos de cepas clínicas Mycobacterium tuberculosis sem a multiplicação do microrganismo.

III. Determinação da concentração mínima inibitória de antimicrobianos para patógenos localizadas no interior de células fagocíticas.

Assinale: 

Bownds e colaboradores (1996) realizaram um dos estudos pioneiros sobre o uso da citometria de fluxo em testes de susceptibilidade a antimicrobianos. Tais pesquisadores usaram a cepa Mycobacterium fortuitum ATCC 14467 e o corante diacetato de fluoresceína (FDA) nos ensaios com antimicrobianos para determinar a concentração mínima inibitória. Na primeira parte do ensaio, os autores avaliaram o padrão de interação do corante com a cepa micobacteriana (viável ou inativada pelo calor) e com o meio de cultura, o qual poderia levar à interpretação errônea dos resultados quanto à fluorescência. Após a incubação, um volume de 10ml de FDA (10 mg/ml; Sigma) foi adicionado às soluções de meio de cultura com células cultivadas por sete dias a 37°C de M. fortuitum ou ao controle negativo de forma a obter uma concentração final de 100 ng/ml. 

As suspensões foram incubadas a 37°C por 30 min e analisadas a 488nm com FACScam flow cytometer (Becton Dickinson Immunocytometry Systems) utilizando FAC Scan Lysys II software para a acquisição de dados e análise. Os gráficos resultantes estão na figura abaixo. 



Legenda da Figura: Os números nos eixos y e x de cada painel são 100 , 101 , 102 , 103 e 104 , respectivamente.

Usando seus conhecimentos de citometria de fluxo e micobacteriologia laboratorial, assinale a alternativa correta. 

A cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) dos ésteres de ácido micólicos demonstrou rapidez e acurácia na identificação de várias espécies de Mycobacterium. Sobre os princípios padronizados e o conhecimento prévio da técnica, analise as afirmativas a seguir.

I. As espécies M. tuberculosis e M. bovis apresentam padrões indistinguíveis.

II. No processo de análise por HPLC, os ésteres de ácidos micólicos são separados em coluna de fase reversa através de gradiente, e detectados por espectrometria UV.

III. Um extrato preparado a partir de cultura com M. fortuitum ATCC 6841 é recomendado para utilização como controle positivo e serve como padrão de referência para nomeação de picos obtidos na análise por espectrometria.

Assinale: 

Nas últimas décadas, estudos sobre aplicações da citometria de fluxo em microbiologia clínica, incluindo detecção de patógenos e testes de susceptibilidade a antimicrobianos, têm contribuído significativamente nas áreas de fisiologia bacteriana e de interações patógeno-hospedeiro. Sobre as variantes metodológicas do método, assinale a alternativa incorreta.