O microrganismo deve ser agrupado e cultivado em cultura mista.

A presença do agente microbiológico deve ser sempre comprovada em apenas alguns casos de doença, não sendo uma obrigatoriedade.

O microrganismo deve causar uma doença diferente quando inoculado em um animal suscetível.

O microrganismo deve causar a mesma doença quando inoculado em um animal suscetível, e o mesmo agente microbiológico deve ser recuperado do animal inoculado.