No Brasil, o Programa Nacional de Controle da Tuberculose (PNCT) é responsável, entre outras ações, por estabelecer as diretrizes para o controle da doença, que tem tratamento padronizado, exclusivamente oferecido pelo Sistema Único de Saúde. A apresentação farmacológica dos medicamentos atualmente em uso para o esquema básico de tratamento em adultos e adolescentes na fase intensiva é de comprimidos em doses fixas combinadas com a apresentação tipo 4 em 1 (rifampicina-RIF, isoniazida-INH, pirazinamida-PZA e etambutol-EMB). Para INH, o principal metabólito ativo é o acetil-INH (AC-INH). Como a terapia combinada com múltiplos fármacos é necessária, um método analítico para monitorar simultaneamente as substâncias em plasma humano também é fundamental, porém alguns métodos publicados, baseados na cromatografia a líquido acoplada à espectrometria de massas sequencial apresentam desvantagens, tais como longo tempo de separação cromatográfica, baixa retenção da INH e separação parcial de AC-INH e INH em colunas de fase reversa. Xing et al (2021) desenvolveram um método de cromatografia a líquido de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas triplo quadrupolo para quantificar simultaneamente RIF, INH, PZA, EMB e o metabólito ACINH em plasma humano. Após precipitação do plasma com acetonitrila e centrifugação, uma alíquota do sobrenadante foi submetida a uma reação de derivatização com cinamaldeído (CA) e diluída com um diluente contendo 20 % de acetonitrila, 0,1 % de ácido fórmico e 2 % de ácido heptafluorobutírico (HFBA). Observe a figura abaixo:



Cromatogramas de INH, AC-INH, CA-INH, e EMB com ou sem adição de CA e HFBA. (A) sem CA e sem HFBA; (B) sem CA e com HFBA; (C) com CA e sem HFBA; (D) com CA e com HFBA. INH = isoniazida; AC-INH = acetil isoniazida; CA-INH = produto de derivatização da isoniazida com cinamaldeído; EMB = etambutol; CA = cinamaldeído; HFBA = ácido heptafluorobutírico. Os picos de cada analito estão destacados por asteriscos (*). Separação cromatográfica realizada em coluna Acquity UPLC HSS T3 1,8 μm (2,1 x 100 mm, Waters). Fonte: Xing et al. Heliyon 2021;7:e07532.
Com base na figura apresentada, pode-se afirmar que:
I – o produto de derivatização CA-INH formado pela reação entre a isoniazida (INH) e o cinamaldeído (CA) possui maior hidrofobicidade que a INH e apresenta maior intensidade de sinal.
II – a adição do reagente de pareamento iônico HFBA à solução diluída da amostra aumentou significativamente a retenção do etambutol (EMB).
III – o analito etambutol (EMB) é menos polar que o produto de derivatização CA-INH.
Dos itens acima, somente:

O objetivo de um método bioanalítico quantitativo é fornecer uma determinação exata, precisa e confiável da quantidade de um analito alvo, geralmente um fármaco, um metabólito ou um biomarcador em amostras biológicas complexas, tais como fluidos ou tecidos. A seletividade de um sistema de detecção triplo quadrupolo no modo de aquisição de monitoramento de reações múltiplas (MRM) é elevada e, em muitos casos, a separação de diferentes analitos por cromatografia a líquido não precisa ser efetuada com o mesmo rigor exigido por outros sistemas de detecção. A separação cromatográfica é realmente necessária na espectrometria de massas sequencial com analisador do tipo triplo quadrupolo no modo de aquisição MRM:
I – para aumentar a sensibilidade, exatidão e precisão do método analítico quantitativo, como resultado da separação eficiente dos analitos alvo de impurezas e outros componentes da matriz complexa, que mesmo não sendo detectados no modo MRM podem competir pela ionização e alterar o sinal obtido.
II – a fim de possibilitar a análise de isóbaros, substâncias quirais e substâncias que podem interferir pela contribuição de isótopos M+1 ou M+2, onde M é a massa monoisotópica.
III – sempre que for preciso analisar mais de uma substância simultaneamente.
Dos itens acima, somente:

Em relação às vantagens da técnica de espectrometria de massas de alta resolução em relação à espectrometria de massas com analisadores do tipo triplo quadrupolo, é INCORRETO afirmar que:

Em relação à eficiência de ionização de uma substância no modo de ionização eletrospray (ESI) na espectrometria de massas de alta resolução (HRMS, do inglês High Resolution Mass Spectrometry), avalie se são verdadeiras (V) ou falsas (F) as afirmativas a seguir:
I – um maior conteúdo de solvente orgânico no eluente aumenta a eficiência de ionização da maioria das substâncias.
II – o pH do eluente não influencia na eficiência de ionização de nenhuma substância.
III – diferentes soluções-tampão, com o mesmo pH, resultam em eficiências de ionização iguais.
As afirmativas I, II e III são, respectivamente:

O preparo de amostras biológicas para análise por cromatografia a líquido acoplada à espectrometria de massas (LC-MS) tem como objetivos os itens abaixo, EXCETO:

As técnicas convencionais mais utilizadas no preparo de amostras biológicas para análise por cromatografia a líquido acoplada à espectrometria de massas possuem vantagens e desvantagens. Estabeleça a correspondência mais adequada entre as colunas I e II.
Coluna I – técnica
1. diluição simples
2. precipitação de proteínas
3. extração líquido-líquido
4. extração por fase sólida (SPE, do inglês solid phase extraction)
Coluna II – desvantagens
( ) menos seletiva que SPE, não remove fosfolipídeos endógenos; pode formar emulsões; difícil de automatizar; trabalhosa; não é ideal para substâncias altamente polares e metabólitos; evaporação do solvente necessária; gera grandes volumes de solventes orgânicos.
( ) seletividade mínima, não remove a maioria dos interferentes da matriz; não há extração ou pré-concentração da amostra; evaporação do solvente pode ser necessária.
( ) pode exigir o desenvolvimento do método para otimizar o protocolo; considerada a mais difícil e cara entre as quatro técnicas.
( ) sem purificação e concentração da amostra; não-seletiva, interferentes podem causar supressão iônica ou formatos ruins de picos; propicia contaminação da coluna analítica e do instrumento.
A sequência correta, de cima para baixo, é: