A batelada simples (BS) apresenta variantes de acordo com a forma de inoculação ao meio de produção, podendo ser classificada como: BS com um inóculo recentemente preparado para cada biorreator, BS com recuperação do inóculo ou BS por cortes (sequencial). Sobre a segunda modalidade de inoculação nesta forma de operação de bioprocessos, assinale a alternativa correta.

Considerando as técnicas de imunoprecipitação e imunoblote (Western blotting), analise as afirmativas a seguir.

I. O imunoblote, como a imunoprecipitação, é usado para identificação da presença de uma determinada proteína em um lisado celular, mas evita o problema de marcar grandes quantidades de células com radioisótopos.

II. Todas as proteínas de uma célula podem ser marcadas metabolicamente acrescentando aminoácidos radioativos no meio de cultura, que serão incorporados às proteínas celulares. Outra opção consiste na marcação apenas de proteínas de superfície celular por radioiodinação sob condições que impedem o iodo de cruzar a membrana plasmática e marcar proteínas intracelulares.

III. As células não-marcadas são colocadas em solução de NaOH 2M para solubilizar todas as proteínas celulares, e o lisado é submetido a SDS-PAGE para separar as proteínas. As proteínas, separadas por tamanho, são, então, transferidas do gel para um suporte estável, tal como agar-agar. Proteínas específicas podem ser detectadas por anticorpos capazes de reagir com proteínas solubilizadas por SDS, sendo os anticorpos ligados revelados com antígenos anti-imunoglobulina marcados com radioisótopos ou com uma célula que carrega o gene do anticorpo marcado. Este processo é conhecido como imunoblote (immunoblotting ou Western blotting).

Assinale:

A variação fenotípica comumente encontrada em uma linhagem bacteriana em testes laboratoriais reflete que:

O Haemophilus influenzae (Hi) é uma bactéria não móvel, estritamente patogênica para os seres humanos, que se abriga comumente no trato respiratório superior. É um organismo gram negativo pleomórfico, podendo variar de pequenos cocobacilos a longos filamentos. As cepas do Hi são capsuladas ou não capsuladas. Entre as capsuladas, diferenciam-se seis sorotipos: a, b, c, d, e, f, baseados na estrutura antigênica dos polissacarídeos capsulares. Apesar de que, tanto as cepas capsuladas como as não capsuladas (não tipificáveis) podem causar doença, as do sorotipo b são responsáveis por mais de 90% das doenças severas em crianças menores de cinco anos. O polissacarídeo do tipo b é um polímero de D-ribose-ribosil fosfato, também conhecido com PRP. O polissacarídeo capsular é o principal fator de virulência das cepas capsuladas, porém existem outros como os lipopolissacarídeos, as proteases para IgA e algumas proteínas da membrana externa. O tipo b é responsável por mais de 95% das infecções invasivas devidas em crianças menores de cinco anos, sendo a meningite uma das mais graves, cujo pico de incidência ocorre entre crianças de seis meses a dois anos de idade. A meningite por Hib tem grande importância para a Saúde Pública por suas características epidemiológicas: alta letalidade nos menores de um ano e transmissibilidade favorecida em locais de aglomeração como as creches. A fonte de microorganismos invasivos é habitualmente a flora bacteriana que coloniza a nasofaringe e/ou a orofaringe. Estima-se que cerca de 3 a 5% das crianças menores de cinco anos na população geral hospedem este microorganismo na nasofaringe, enquanto que em comunicantes da mesma faixa etária, este percentual pode chegar de 14 a 22%. A colonização pode persistir na orofaringe por muitos meses. A transmissão se dá pessoa a pessoa via aerossóis e/ou secreções orais. Em geral, um período longo de portador, com colonização das mucosas respiratórias é a regra para a posterior doença invasiva.

No que tange ao desenvolvimento de vacinas contra bactérias encapsuladas como Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae e Neisseria meningitidis, o antígeno de maior eficiência para formulação de vacinas é o próprio polissacarídeo componente da capsula e principal fator de virulência. Vacinas com esta formulação são designadas vacinas de polissacarídeos. No caso específico de Hib, a vacina é então composta do polissacarídeo que corresponde a subunidade constitutuiva da cápsula. Estas vacinas não induzem a produção de anticorpos em crianças com menos de um ano, considerado grupo de alto risco, pois o sistema imunológico se encontra em processo de maturação. Quando estes polissacarídeos são conjugados quimicamente a proteínas carreadoras, os novos antígenos são capazes de serem reconhecidos pelas células T e macrófagos, gerando uma resposta imune característica dos antígenos T-dependentes e tornam-se eficientes para os grupos de alto risco.

A esse respeito, analise as afirmativas a seguir.

I. Diversos métodos de conjugação estão descritos na literatura sendo que a maioria desses métodos inclui a inserção da molécula espaçadora entre o polissacarídeo e a proteína. As principais metodologias clássicas de conjugação são: o método do brometo de cianogênio, método da carbodiimida e aminação redutiva.

II. O método do brometo de cianogênio compreende a ativação randômica das hidroxilas do polissacarídeo que podem reagir diretamente com aminogrupos (das proteínas, por exemplo) formando o conjugado ou reagir com espaçadores moleculares como as hidrazidas.

III. O método da aminação redutiva prevê a ligação dos radicais aldeídos (gerados pela oxidação das hidroxilas) ao aminogrupo da proteína formando o conjugado. Esta metodologia, muitas vezes, implica na adição de agentes bactericidas para prevenção de crescimento de bactérias que possam contaminar a solução, pois o tempo da reação para a formação do conjugado costuma ser muito curto (cerca de cinco horas).

Assinale:

A vacinação sistemática de segmentos da população implica na necessidade da produção industrial de vacinas e, portanto, no desenvolvimento de tecnologias adequadas para atender tais demandas. A meningite meningocócica é uma doença provocada pela bactéria Neisseria meningitidis, que quando entra no sangue ou fluido espinhal dá origem a uma infecção sistêmica. Este agente infeccioso é revestido com uma cápsula polissacarídica que a torna resistente ao ataque dos leucócitos. A vacina estimula a produção de anticorpos anticapsulares, promovendo uma imunidade ativa contra os sorogrupos da bactéria presentes na vacina. A vacina contra o meningococo C é composta por polissacarídeos capsulares. No tocante à bacteriologia da produção de vacinas monovalentes e bivalentes conjugadas e aos conceitos sobre purificação de polissacarídeos bacterianos, analise as afirmativas a seguir.

I. Após a fermentação a cultura é aquecida no próprio biorreator a 55ºC por 15 minutos, com o objetivo de inativar as células bacterianas. Na seqüência, dois métodos podem ser empregados para uma primeira etapa de separação do polissacarídeo: Em um deles, o polissacarídeo é precipitado juntamente com as células, por meio de um agente de precipitação e em um outro, as células são separadas primeiramente do meio por centrifugação, sendo o polissacarídeo liberado das cápsulas bacterianas para o meio, devido às forças de cisalhamento provocadas pela centrífuga.

II. Após a remoção dos fragmentos celulares, ácidos nucléicos e proteínas, tem-se uma solução parcialmente purificada que contém, nesse estágio, moléculas do polissacarídeo de interesse e de lipopolissacarídeo (endotoxina). O volume desta solução é reduzido, quer por ultrafiltração ou pela adição de acetato de sódio e precipitação com etanol na concentração final de 80%.

III. A vacina monovalente C, confere uma proteção com duração limitada, quando aplicada em crianças com menos de dois anos. Se o polissacarídeo for ligado covalentemente a determinadas proteínas, tal proteção terá maior duração. Um exemplo é a vacina constituída pelo polissacarídeo C conjugado com as proteínas de membrana bacteriana do sorogrupo B e que representa uma possibilidade promissora na imunização contra meningite B/C.

Assinale:

No estudo da cinética do crescimento microbiano, são importantes os trabalhos de Monod. A constante de saturação (K_S) da equação de Monod [µ=µ_mS/(K_S+S)] é:

Os processos levados a cabo por microrganismos podem ser operados em batelada simples, batelada alimentada e continuamente. A eleição de uma destas formas de operação deve ser feita criteriosamente, levando-se em conta, fundamentalmente, a fisiologia do agente do bioprocesso. Com base nestas informações, considere as alternativas a seguir e indique a única incorreta.

O tempo de duplicação da massa celular de um determinado cultivo microbiano, que cresce exponencialmente [X=X_oexp(µ_xt)], à temperatura T₁ é o dobro do verificado à temperatura T₂, a qual é menor que T₁. Sendo µ₁ e µ₂ as taxas específicas de crescimento, respectivamente, às temperaturas T₁ e T₂, o valor de µ₁ é:

Nota:

X: concentração de células em qualquer tempo do crescimento microbiano, g/L

X_o: concentração inicial de células, g/L

µ: taxa específica de crescimento microbiano, min^-1

T: tempo, min

Em um ensaio de RIA/ELISA competitivo, podemos afirmar que:
I. Pelo uso de quantidades conhecidas de um antígeno padrão marcado, pode-se gerar uma curva padrão, relacionando a radioatividade da enzima ligada versus a quantidade do antígeno. A partir desta curva padrão, a quantidade de um antígeno pode ser determinada em uma amostra desconhecida, pois o antígeno marcado e o não marcado estarão competindo pela ligação ao anticorpo utilizado no ensaio. II. A separação dos complexos imune do restante dos componentes presentes na amostra pode ser obtida pela técnica de Far, que irá precipitar imunoglobulinas mas não muitos antígenos. III. O anticorpo pode ser imobilizado na superfície de uma pérola de plástico ou cobrindo a superfície de uma placa de plástico e, assim, os complexos imune podem facilmente ser separados dos outros componentes presentes na amostra pela simples lavagem das pérolas ou da placa (competitivo de fase sólida).
Assinale:

Se você, hipoteticamente, quisesse construir um plasmídio contendo um gene para a produção em larga escala de uma proteína do vírus da dengue em bactérias você teria que adicionar uma seqüência que permita a ligação de ribossomos no mRNA transcrito permitindo assim que este gene seja traduzido no sistema heterólogo da bactéria. Esta seqüência é denominada sequência:

A clonagem pelo método de shotgun se diferencia da metodologia convencional de clonagem pois:

A técnica de Chromossome walking é utilizada com a finalidade de:

O seqüênciamento de DNA pode ser otimizado pela introdução de 7-deaza-citidina. Esta adaptação é utilizada quando a seqüência a ser determinada:

O seqüenciamento de um genoma eucarioto é um projeto de grande porte, que exige a realização de várias etapas experimentais. Para a a otimização deste tipo de projeto uma etapa fundamental é a:

A definição de nested-PCR ou PCR “aninhado" é:

O diagnóstico da infecção pelo vírus da dengue em humanos ainda é um grande desafio para a saúde pública. O desenvolvimento de imuno-ensaios rápidos, sensíveis e específicos é fundamental para melhorar o diagnóstico laboratorial da doença. São etapas essenciais para a elaboração de novos kits para diagnosticar pacientes infectados, as opções abaixo, exceto:

Um pesquisador queria analisar a expressão diferencial de vários genes após o tratamento de células tumorais com uma nova droga. Para esta análise, a melhor técnica a ser empregada seria:

O método de seqüenciamento Sanger:

Sobre pirosequenciamento, assinale a afirmativa incorreta.

A poliproteína do vírus da dengue, depois de produzida, sofre clivagens mediadas por enzimas do hospedeiro vertebrado e por enzimas virais. Sobre tal processamento, podemos afirmar que todas as clivagens que ocorrem: