Para a realização de PCR diagnóstico, utiliza-se frequentemente iniciadores degenerados ou contendo inosina como base nitrogenada a fim de maximizar a chance de detecção em amostras clínicas do ácido nucléico de patógenos que apresentem alta taxa de polimorfismos. Sobre o tema, analise as afirmativas a seguir.

I. Iniciadores degenerados são misturas de oligonucleotídeos apresentando diferenças nos nucleotídeos em várias posições.

II. A inosina é uma base que pareia somente com adenina e timina.

III. Não é possível sintetizar iniciadores degenerados e que, ao mesmo tempo, contenham inosina.

Assinale: 

O estabelecimento de uma reação de PCR para o diagnóstico molecular de agentes infecciosos a partir de amostras biológicas muitas vezes apresenta como maior dificuldade a amplificação específica do fragmento genômico do patógeno de interesse. As afirmativas a seguir enumeram possibilidades para aumentar a especificidade da reação.

I. Aumento da concentração de deoxinucleotídeo na reação de PCR.

II. Aumento da concentração da DNA polimerase na reação de PCR.

III. Realização de reações de PCR aninhadas (PCR-nested), utilizando par de iniciadores mais externos à região de interesse na primeira reação, seguido da utilização de par de iniciadores mais internos.

Assinale: 

Em relação aos métodos sorológicos de diagnóstico, assinale a alternativa incorreta.

Um pesquisador desenvolveu um teste ELISA para a detecção de anticorpos anti-HIV a fim de ser utilizado como teste diagnóstico para esta infecção. Com o intuito de verificar a sensibilidade e a especificidade de seu novo teste, o pesquisador utilizou um banco de soros sabidamente positivos para a presença de anticorpos anti-HIV (1.000 soros) e um banco de soros sabidamente negativos para a presença de anticorpos anti-HIV (1.000 soros). Seus resultados foram: dos 1000 soros positivos seu teste detectou 920 positivos; dos 1000 soros negativos seu teste detectou 1 positivo. Sobre esses resultados, analise as afirmativas abaixo. 

I. Pode-se dizer que com este novo teste houve um número de 80 resultados falso-positivos e um resultado falso-negativo.

II. Define-se sensibilidade como a percentagem dos resultados que serão negativos quando o anticorpo testado não estiver presente.

III. Um ensaio pouco sensível significa que haverá a detecção de um grande número de falso-negativos.

Assinale: 

Os seguintes componentes essenciais são requeridos em uma reação de PCR, exceto:

Sobre a técnica de ELISA, assinale a alternativa incorreta:

Sobre as boas práticas laboratoriais relacionadas à rotina de diagnóstico molecular por PCR, analise as afirmativas a seguir.

I. A única área que deve ser separada fisicamente das demais, no laboratório que realiza diagnóstico molecular por PCR, é a área onde é realizada a extração de ácidos nucléicos a partir das amostras clínicas.

II. O fluxo de trabalho, no laboratório que realiza diagnóstico molecular por PCR, deve ser sempre a partir da área livre de DNA para a área onde os tubos das reações finais de PCR são abertos ou manipulados (área que contem amplicons).

III. Para a pipetagem das misturas de PCR, diluição de oligonucleotídeos, etc, não é necessária a utilização de ponteiras com barreira.

Assinale: 

Assinale a afirmativa incorreta:

Analise as afirmativas abaixo em relação às características das culturas primárias e linhagens permanentes.

I. Culturas primárias podem permanecer em divisão por um longo tempo, porém o número de divisões é sempre finito.

II. A obtenção de uma linhagem permanente pode acontecer a partir de uma modificação que aconteça aleatoriamente em uma ou poucas células presentes em uma cultura, dando-lhe(s) a característica de proliferação indefinida. Alternativamente, esta característica pode ser obtida a partir da transformação das células primárias por exemplo por infecção por vírus carcinogênico.

III. As culturas primárias normais sempre darão origem naturalmente à linhagens celulares permanentes ou contínuas.

Assinale: 

A fim de garantir a homogeneidade e a reprodutibilidade da experimentação envolvendo culturas celulares, é necessário que, antes da utilização de células para montagem de experimentos, seja realizada a contagem das mesmas. Todas as afirmativas abaixo se relacionam ao procedimento correto de contagem e ao cálculo do número de células em uma suspensão, exceto uma. Assinale-a.

O subcultivo da maioria das células aderentes envolve a utilização da protease tripsina e do sal EDTA. Sobre o motivo da utilização destes reagentes no procedimento de subcultivo celular, analise as afirmativas a seguir.

I. As células aderem à superfície inferior da garrafa de cultivo e umas as outras pelas proteínas que compõe a matriz extracelular. Enquanto a tripsina reconhece e cliva regiões nativas destas proteínas, a função do EDTA é quelar os íons Ca²⁺, que são requeridos para a ligação célula-célula mediada pelas caderinas. Desta forma, tanto o EDTA quanto a tripsina servirão para promover o destacamento das células do frasco de cultivo e sua separação.

II. As células são cultivadas geralmente na presença de soro que fornece fatores de crescimento necessários para a divisão celular. A fim de realizar o subcultivo é necessário eliminar o soro presente no meio. A tripsina irá clivar as proteínas do soro e o EDTA facilitará a formação de agregados protéicos que serão facilmente removidos ao se descartar este meio, promovendo assim a retirada do soro do meio de cultivo.

III. As células aderem à superfície inferior da garrafa de cultivo e umas as outras através das proteínas que compõe a matriz extracelular. A tripsina reconhece e cliva regiões nativas destas proteínas e a função do EDTA é servir de co-fator para a tripsina aumentando sua atividade. Desta forma, promovendo o destacamento das células do frasco de cultivo e sua separação.

Assinale:

Assinale a alternativa incorreta.

Sabe-se que a viabilidade celular é um importante parâmetro de controle para a manutenção dos bancos celulares, sejam oriundos de sistemas procarióticos ou eucarióticos. No entanto, outros parâmetros são descritos para o controle preciso destes materiais.

Assinale a afirmativa incorreta.

Em relação à estabilidade genética do Sistema de banco de células, várias metodologias são compatíveis para avaliação das linhagens celulares e listadas a seguir, exceto,:

Em relação aos aspectos gerais de cultura de células primárias e linhagens celulares, analise as afirmativas a seguir.

I. As culturas celulares apresentam freqüentemente muitas propriedades diferenciadas: fibroblastos continuam a secretar colágeno; células derivadas de músculo esquelético embrionário fusionam-se para formar fibras musculares gigantes, que contraem espontaneamente na placa de cultura; células nervosas lançam axônios que são eletricamente excitáveis e fazem sinapse com outra célula nervosa; e células epiteliais formam extensivas lâminas com muitas das propriedades de um epitélio intacto.

II. A otimização de meios de cultivo para as culturas celulares tem sido um desafio para o setor industrial. Meios sem soro e meios quimicamente definidos são alvos de pesquisas. Os meios definidos contêm uma ou mais proteínas específicas as quais a maioria das células necessita para sobreviver e proliferar em cultura. Estas atuam como fatores de crescimento, estimulando a proliferação celular e outras funções como, por exemplo, a transferina, que transporta cálcio e potássio para dentro das células através de canais apropriados.

III. Meios quimicamente definidos sem soro tem facilitado a sobrevivência, desenvolvimento e proliferação de tipos específicos de células, como por exemplo, as utilizadas para a produção de moléculas sinalizadoras protéicas extracelulares.

Assinale:

As culturas de células animais podem ser classificadas de acordo com sua origem e biologia em: culturas primárias e linhagens celulares. Sobre o tema, analise as afirmativas a seguir.

I. São denominadas linhagens celulares finitas, as células capazes de um número limitado de duplicações, após o qual a proliferação cessa e linhagens celulares contínuas aquelas a serem propagadas e expandidas.

II. As linhagens celulares imortalizadas podem ocorrer espontaneamente (sendo um acontecimento raro) ou após transformação, que pode ser induzida por agentes químicos carcinogênicos, por introdução no genoma da célula de um gene viral ou um oncogene capaz de ultrapassar a senescência ou ainda recorrendo à infecção com vírus.

III. As células diplóides têm características de senescência e acabam por morrer em cultura após um número definido de gerações. A grande desvantagem deste tipo de células é que elas apresentam crescimento lento, não atingem altas densidades celulares, têm produtividade relativamente baixa e são altamente dependentes de adesão em suportes para o crescimento.

Assinale:

O avanço científico tem permitido o emprego industrial de microorganismos ou células modificadas geneticamente, visando produção de proteínas de interesse em diversas áreas, especialmente na saúde humana. O cultivo e a manutenção das células modificadas é ponto fundamental de controle e monitoramento dos diferentes produtos. Em relação ao tema cultura de células primárias e de linhagens, analise as afirmativas a seguir.

I. As culturas primárias são isoladas diretamente de órgãos ou tecidos. São denominadas primárias até a sua primeira passagem ou diluição, após o que são consideradas sub-culturas.

II. As linhagens celulares contínuas possuem crescimento celular mais rápido podendo-se atingir altas densidades celulares em biorreatores.

III. Uma grande desvantagem das linhagens celulares contínuas é a acentuada instabilidade cromossômica, maiores variações relativamente aos fenótipos de origem e o desaparecimento de marcadores específicos e característicos do tecido de origem.

Assinale:

Em relação ao cultivo de células transfectadas em biorreatores, analise as afirmativas a seguir:

I. Muitas linhagens celulares são consideradas de adesão, isto porque nas células atuam forças atrativas intermoleculares. O mecanismo de adesão envolve quatro fases: adsorção, contato, junção e propagação.

II. A adesão celular foi considerada um elemento chave de evolução. A adesão célula-célula foi essencial ao desenvolvimento de organismos multicelulares e representa juntamente com a adesão célula-matriz um papel fundamental na regulação gênica.

III. Os cultivos celulares de adesão possuem maiores rendimentos se forem realizados em Frasco Spinner quando comparados com os cultivos estáticos.

Assinale:

Em relação ao cultivo de células transfectadas em biorreatores, analise as afirmativas a seguir.

I. O emprego da tecnologia de cultura de células em microcarregadores permite o aumento da capacidade de produção das moléculas terapêuticas, devido à razão extremamente alta entre a área da superfície e o volume disposto pelos microcarregadores. Muito empregado para as culturas de adesão.

II. Os materiais usados para fabricação dos microcarregadores são de natureza porosa. Dependendo da dimensão dos poros, eles são classificados em microporosos e macroporosos.

III. Os microcarregadores microporosos consistem de partículas com dimensões de 0,4 a 5 mm com cavidades internas que permitem a adesão e o crescimento das células em seu interior. Este tipo de microcarregador foi desenvolvido com a finalidade de permitir o crescimento das células de forma tridimensional de modo a atingir altas concentrações.

Assinale:

Em relação ao cultivo de células transfectadas em biorreatores, analise as afirmativas a seguir:

I. Para os cultivos celulares em tanques agitados existem vários sistemas de transferência de oxigênio, como aspersão direta, micro-aspersão e difusão por membranas.

II. Ao se estudar a cinética de crescimento de células cultivadas em biorreatores, percebe-se que a velocidade específica de respiração das células animais é consideravelmente menor que a de células microbianas.

III. As estratégias de controle da concentração de oxigênio dissolvido estão associadas ao termo de transferência de oxigênio de uma equação de balanço de massa, onde o k_La é o coeficiente volumétrico de transferência de oxigênio e pode ser facilmente alterado manipulando-se a freqüência de agitação ou a vazão de aeração.

Assinale: